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人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/7/29瀏覽:152次
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  以下是關(guān)于人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理:

  BS-1394人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒

  一、實驗原理

  采用雙抗體夾心法,通過包被抗體捕獲樣本中的αNAG,再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合形成復(fù)合物。加入TMB底物顯色后,顏色深淺與αNAG濃度成正比,450nm波長下測定OD值計算濃度?。

  二、試劑盒組成

  預(yù)包被酶標(biāo)板?:96孔板?

  標(biāo)準(zhǔn)品?:凍干粉(通常含100 μg/ml原液),需用樣品稀釋液復(fù)溶后梯度稀釋?

  檢測溶液?:包括生物素標(biāo)記抗體、HRP標(biāo)記親和素(需1:100稀釋使用)?

  底物溶液?:TMB顯色液(A/B液需避光保存)?

  終止液?:2N H2SO4溶液?

  洗滌液?:30倍濃縮液,使用前需蒸餾水稀釋?

  三、樣本處理

  血清/血漿?:采集后離心(1000×g,10-20分鐘),避免溶血或反復(fù)凍融?

  細胞上清液?:離心去除顆粒物?

  組織樣本?:需勻漿后離心取上清?

  四、操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說明書梯度稀釋(如100→1.56 μg/ml)?

  加樣?:

  標(biāo)準(zhǔn)品孔:50μl/孔

  樣本孔:40μl稀釋液 + 10μl樣本(5倍稀釋)?

  孵育?:37℃溫育30-60分鐘?

  洗滌?:用稀釋后的洗滌液洗板5次,拍干?

  顯色?:每孔加TMB底物A/B液各50μl,避光反應(yīng)15分鐘?

  終止?:加入終止液50μl,立即測定OD450值?

  五、注意事項

  試劑使用前需平衡至室溫(20-30分鐘)?

  避免底物接觸金屬器械或強光?

  不同批次試劑不可混用?

  顯色后需在15分鐘內(nèi)讀數(shù)?

  六、結(jié)果計算

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過曲線方程計算樣本濃度?。

  如需具體品牌試劑盒的完整說明書,可參考技術(shù)老師

  注:以上資料僅供參考,本說明綜合了多個廠商的通用流程,實際操作請以具體試劑盒說明書為準(zhǔn)?。

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