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ELISA樣本稀釋:如何“稀釋”出準(zhǔn)確結(jié)果?
更新時(shí)間:2025-10-22瀏覽:92次

  ELISA樣本稀釋:如何“稀釋"出準(zhǔn)確結(jié)果?

  ELISA樣本稀釋操作指南

  一、稀釋核心原則

  樣本稀釋后OD值應(yīng)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線最高值OD值的半量程內(nèi)(如標(biāo)準(zhǔn)品最高OD=2.4時(shí),目標(biāo)OD≈1.2),此時(shí)計(jì)算誤差最小?。高濃度樣本(如IgG、TNFα)需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù),避免鉤狀效應(yīng)?。

  二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程

  梯度稀釋法?

  大比例稀釋(如200倍)分步進(jìn)行:先10倍稀釋,再基于此稀釋20倍?

  使用校準(zhǔn)移液器,單次取樣量≥5μL,避免氣泡殘留?

  稀釋液選擇?

  含0.05% Tween-20的PBS降低背景,5%脫脂牛奶適合高基質(zhì)樣本?

  復(fù)雜樣本(組織勻漿)需預(yù)處理:離心或超聲裂解?


  三、常見問題處理

  假陽性?:類風(fēng)濕因子干擾樣本可加熱滅活(100℃ 1分鐘)

  信號(hào)異常?:溶血樣本需棄用,EDTA濃度需<5 mM?

  基質(zhì)干擾?:血清樣本建議4℃靜置離心去除纖維蛋白?

  四、前沿技術(shù)應(yīng)用

  納米標(biāo)記技術(shù)?:提升靈敏度,但需優(yōu)化穩(wěn)定性?

  自動(dòng)化稀釋系統(tǒng)?:減少人為誤差,適合高通量檢測?

  通過規(guī)范操作和梯度稀釋策略,可確保檢測結(jié)果落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),顯著提升數(shù)據(jù)可靠性?。

  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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