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實驗干貨:ELISA洗板操作要點
更新時間:2025-07-29瀏覽:175次

  實驗干貨:ELISA洗板操作要點

  準確儀器和準確的操作是保證ELISA結(jié)果準確關(guān)鍵,怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實驗中一般有5次加樣,即加標本、加檢測抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。下面BUNSEN本生小編詳解如下:

  1、實驗室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感,每孔加入液體量誤差會導致最后讀數(shù)差別,因此避免儀器帶來誤差。

  2、加樣前,溶液充分混勻,垂直懸空加入液體,避免加在孔壁上,不可產(chǎn)生氣泡。

  3、加樣時避免液體濺出,如有樣本濺出,應(yīng)用吸水紙輕輕拭干,并做相應(yīng)記錄。

  4、如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠,不能用槍吸出再加,做相應(yīng)記錄實驗。

  5、每次加樣順序一致,尤其底物、終止液順序一致,保證每個孔顯色時間相同。

  

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  ELISA實驗通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此,不嚴格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 洗滌是ELISA實驗操作最多一個步驟,如何洗板呢?

  1、BUNSEN本生ELISA 洗液需要20倍稀釋,配置時用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水現(xiàn)配現(xiàn)用。洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。

  2、垂直倒液,迅速、干脆,重復2-3次,不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來倒液體。

  3、倒液后將酶標板放在吸水紙拍干。用干凈的濾紙,不要用衛(wèi)生紙,因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底,導致洗板不干凈,結(jié)果偏高或偏低,重復孔的數(shù)值也會相差很大。

  4、每孔加300uL洗液,太多將溢出孔外污染相鄰的孔。特別是每次洗板的前兩遍,若高濃度孔流串到低濃度孔或空白孔,其造成的交叉污染將無法洗掉,背景增高。

  5、加入洗液浸泡30s。洗板時間太短,洗滌效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

  6、每次拍板不要重復在一個地方拍,特別是洗去酶的步驟;拍板不宜過輕,否則拍不干凈,拍板不要太重,以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下,最后一次一定要扣干凈。

  7、不管用多道加樣器、洗瓶、吸管,還是洗板機,嚴格按照說明書操作不要減少洗滌體積、洗滌時間和次數(shù)。

  8、扣干后的酶標板立即加液,不能干板太久。

  注:以上資料僅供參考,具體產(chǎn)品信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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