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如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實操指南
更新時間:2025-06-17瀏覽:431次

  如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實操指南

  以下是天津本生使用Roche 480配套PCR板時避免交叉污染與信號干擾的詳細操作指南:

  一、實驗前準備?

  耗材選擇?

  必須使用與LightCycler® 480匹配的96孔PCR板(推薦半裙邊白色板)。

  選擇專用光學(xué)封板膜,確保密封性并減少熒光背景干擾。

  滅菌處理?

  新開封的PCR板需紫外線照射15分鐘或高壓滅菌(若材料允許)。

  操作臺和移液器需用75%乙醇擦拭消毒。


PCR板.png


  二、反應(yīng)體系配置?

  加樣規(guī)范?

  反應(yīng)液需在冰上配制,避免高溫降解。

  每孔體積嚴格控制在20μL(誤差<1μL),使用低吸附吸頭分裝。

  防污染措施?

  分區(qū)操作:核酸提取、體系配制、PCR擴增需在不同超凈臺進行。

  每加樣一次更換吸頭,避免氣溶膠污染。

  三、封板與離心?

  密封操作?

  封膜時需覆蓋孔口,輕壓邊緣排除氣泡。

  禁止使用記號筆在板或膜上標(biāo)記(可能干擾熒光信號)。

  離心參數(shù)?

  2000 rpm離心30秒,確保液體集中至孔底。

  四、儀器操作?

  裝板注意事項?

  確認板底清潔干燥,避免指紋或灰塵影響光學(xué)檢測。

  放入儀器時對準托架卡槽,避免傾斜。

  程序設(shè)置?

  熱蓋溫度設(shè)為105°C,防止蒸發(fā)。

  熒光采集通道需與染料匹配(如FAM通道用于SYBR Green)。

  五、實驗后處理?

  數(shù)據(jù)保存?

  使用光盤刻錄原始數(shù)據(jù),避免U盤傳輸導(dǎo)致文件損壞。

  耗材廢棄?

  PCR板為一次性使用,禁止剪開重復(fù)利用。

  實驗結(jié)束后立即帶離實驗室,按生物危害廢物處理。

  關(guān)鍵問題規(guī)避?

  交叉污染?:

  操作全程佩戴無粉手套;

  每批次實驗預(yù)留至少2孔陰性對照。

  信號干擾?:

  白色PCR板可減少背景熒光;

  避免強光直射反應(yīng)板。

  通過規(guī)范操作流程和嚴格分區(qū)管理,可顯著提升實驗結(jié)果可靠性。

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  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師。

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